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第一章　绪论——免疫学技术应用策略1

一、抗体的应用1

二、抗原-抗体反应技术的应用2

三、免疫细胞分离及功能测定技术的应用3

四、分子免疫学技术5

第二章　抗体的制备及鉴定6

第一节　单克隆抗体的制备及鉴定6

一、杂交瘤技术和单克隆抗体的基本概念6

二、制备单克隆抗体前的准备工作7

三、细胞融合13

四、细胞融合后的选择性培养15

五、单克隆抗体的筛选与检测16

六、杂交瘤细胞克隆化17

七、杂交瘤细胞及单克隆抗体鉴定的几种方法18

八、杂交瘤细胞的冻存与复苏24

九、单克隆抗体的大量制备26

十、单克隆抗体的纯化27

第二节　多克隆抗体的制备及鉴定30

一、抗原30

二、动物30

三、佐剂30

四、免疫方案30

五、抗体的鉴定31

六、抗体纯化31

七、血清的冻存32

八、多克隆抗体制备方法举例32

第三章　非放射性免疫标记技术34

第一节　酶免疫测定34

一、实验原理34

二、试剂与材料35

三、实验流程36

四、问题及其解决策略37

第二节　免疫荧光38

一、实验原理38

二、主要技术条件38

三、实验流程39

四、应用举例——间接法检测抗核抗体40

第三节　免疫胶体金41

一、实验原理41

二、胶体金标记技术在免疫学中的应用42

三、应用举例——胶体金技术用于妊娠检测43

第四章　放射免疫标记技术45

第一节　放射性同位素标记抗原45

一、常用标记方法45

二、放射性标记物的分离纯化48

第二节　放射免疫分析技术48

一、实验原理48

二、主要技术条件49

第三节　免疫放射分析50

第四节　免疫细胞受体放射分析51

第五节　应用举例53

一、人卵泡休止素放射免疫分析53

二、人卵泡休止素免疫放射分析54

三、问题及其解决策略55

第五章　免疫细胞化学技术56

第一节　免疫细胞化学技术56

一、免疫细胞化学技术的基本环节56

二、抗体的选择59

三、免疫细胞化学技术的主要影响因素62

四、操作步骤和常见问题62

第二节　免疫细胞化学的衍生技术69

一、双标记染色法69

二、免疫细胞化学技术与放射自显影技术的联合使用70

三、细胞表面蛋白的染色70

四、应用免疫细胞化学技术进行细胞分选70

五、应用免疫细胞化学技术进行定量检测71

六、生物素-链霉亲和素在免疫细胞化学技术的应用71

第三节　应用举例72

一、巨噬细胞抗卵泡抑素抗体染色——ABC法72

二、免疫酶染色技术-APAAP法72

第六章　蛋白质抗原T细胞表位的鉴定75

第一节　CTL表位的鉴定75

一、抗原特异性CTL细胞克隆的建立75

二、抗原多肽片段的获得76

三、多肽亲和力测定77

四、CTLs的体外诱导78

五、CTL活性检测79

第二节　Th细胞表位的鉴定81

一、抗原特异性CD4+T细胞克隆的建立81

二、抗原多肽片段的获得81

三、肽结合试验82

四、肽特异性CD4+T细胞的诱导83

五、细胞增殖试验83

六、MHC限制性确定83

七、细胞因子分析83

第三节　MHC分型84

一、血清学方法84

二、PCR-SSP85

第四节　应用举例85

第七章　免疫印迹90

第一节　蛋白质抗原电泳分离90

一、样本处理90

二、凝胶选择91

三、蛋白标准品选择92

四、SDS-PAGE基本流程93

第二节　蛋白质的转膜93

一、半干式电转印94

二、湿式电转印95

三、点印迹97

第三节　免疫检测97

一、抗体的选择97

二、封闭97

三、抗体杂交98

四、检测98

第四节　蛋白印迹在免疫学中的应用100

第五节　应用举例100

Follistatin表达的Western blot鉴定100

第六节　DNA/RNA印迹的免疫学检测技术101

一、DNA印迹101

二、RNA印迹103

三、Southern和Northern Blot在免疫学中的应用104

第八章　免疫沉淀及沉降技术106

第一节　免疫沉淀106

一、细胞裂解107

二、沉淀抗原抗体复合物108

三、实验方法108

四、免疫沉淀的应用举例110

第二节　免疫共沉淀111

第三节　沉降技术（pull-down）113

第九章　免疫细胞分离115

第一节　单个核细胞的分离115

一、材料和仪器116

二、实验流程116

三、问题与解决策略116

第二节　单核-巨噬细胞的分离117

一、材料和仪器118

二、实验流程118

第三节　T、B淋巴细胞选择性分离和纯化118

一、尼龙棉柱法富集T淋巴细胞119

二、补体介导细胞毒剔除B细胞及辅佐细胞富集T细胞120

三、通过补体细胞毒作用剔除小鼠T淋巴细胞或其亚群121

第四节　NK细胞的分离纯化121

一、材料和仪器121

二、实验流程121

三、问题及解决策略122

第五节　中性粒细胞分离122

一、材料和仪器122

二、实验流程122

第六节　树突状细胞的诱导培养和分离123

一、小鼠骨髓来源的DC123

二、人外周血单核细胞来源的DC125

三、人CD34+干细胞来源的DC125

第七节　免疫磁珠分选免疫细胞及其亚群126

一、材料和仪器126

二、实验流程126

三、问题及解决策略127

第十章　流式细胞术128

第一节　流式细胞术的原理128

第二节　细胞表面分子分析131

第三节　可溶性分子的检测133

第四节　T淋巴细胞行为和功能分析134

第五节　细胞分选原理及其应用137

一、小鼠T淋巴细胞活化实验138

二、CFDA-SE标记检测小鼠淋巴细胞增殖实验139

三、小鼠胸腺细胞凋亡的检测141

四、细胞内细胞因子染色技术分析人外周血淋巴细胞分化水平142

第十一章　免疫细胞增殖试验144

第一节　细胞培养与冻存144

一、细胞传代培养144

二、冻存与复苏145

第二节　细胞增殖检测方法146

一、台盼蓝拒染法146

二、BrdU检测法147

三、3H-TdR掺入法148

四、MTT比色法149

第三节　T、B淋巴细胞增殖试验149

一、T淋巴细胞增殖试验150

二、B淋巴细胞增殖试验150

第四节　免疫相关细胞的增殖试验150

一、细胞因子依赖的细胞株增殖150

二、混合淋巴细胞培养151

三、细胞因子依赖的其他免疫细胞增殖151

第五节　应用举例153

一、植物血凝素诱导T淋巴细胞增殖153

二、混合淋巴细胞培养154

第十二章　细胞毒实验技术156

第一节　NK细胞活性测定156

一、效应细胞的制备156

二、靶细胞的制备156

三、效-靶细胞作用及检测方法157

第二节 细胞毒性T细胞功能测定160

一、效应细胞-特异性CTL的诱导和制备160

二、靶细胞的制备162

三、特异性抗原诱导的细胞毒性T细胞功能测定162

第三节　应用举例166

一、LDH法检测人外周血NK细胞杀伤活性166

二、51Cr释放法检测人抗原特异性细胞毒性T细胞功能166

第十三章　免疫细胞吞噬功能测定168

第一节　单核／巨噬细胞系吞噬功能测定168

一、体内法与体外法168

二、巨噬细胞的制备169

三、吞噬微粒的选择170

四、吞噬效率的测定170

第二节　中性粒细胞吞噬功能测定172

第三节　应用举例173

一、巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验173

二、中性粒细胞吞噬功能的检测174

第十四章　免疫细胞凋亡176

第一节　细胞凋亡的形态学研究方法177

一、光学显微镜观察177

二、荧光显微镜观察179

三、电子显微镜观察181

第二节　细胞凋亡的生物化学研究方法183

一、凋亡细胞的DNA Ladder183

二、末端标记法185

三、免疫印迹检测凋亡细胞的caspase活化187

四、免疫印迹检测凋亡细胞线粒体细胞色素C的释放189

第三节　流式细胞术检测细胞凋亡的常用方法191

一、亚二倍体分析法192

二、Annexin V/PI双染法193

三、线粒体膜电位检测195

四、TUNEL法197

第十五章 细胞因子检测201

第一节　细胞因子及其受体检测方法概述201

一、生物学活性检测法201

二、免疫学检测法202

三、分子生物学检测法202

第二节　常见的细胞因子生物学活性检测204

一、IL-1生物学活性检测204

二、IL-2生物学活性检测205

三、IL-10生物学活性检测206

四、干扰素的生物学活性检测207

五、肿瘤坏死因子的生物学活性检测208

第三节　细胞内细胞因子检测法209

第四节　ELISPOT技术212

第十六章　经典免疫学实验216

第一节　凝集反应216

一、直接凝集反应216

二、间接凝集试验217

三、应用举例221

第二节　沉淀反应221

一、液体内沉淀反应222

二、凝胶内沉淀试验224

三、应用举例226

第三节　补体的测定226

一、补体总活性测定（CH50）227

二、脂质体均相免疫溶破试验229

三、补体旁路途径溶血活性的测定（ACH50）230

四、单个补体成分的测定230

五、应用举例231

第四节　循环免疫复合物的测定232

一、抗原特异性检测方法232

二、抗原非特异性检测方法232

三、应用举例235

第五节　B细胞溶血空斑试验236

一、琼脂溶血空斑法236

二、液相单层溶血空斑法237

三、应用举例237

附录239

一、常用缓冲液、试剂的配制239

二、酶免疫检测常用试剂配制244

三、细胞相关试剂配制245

四、染色液配制249

五、固定剂250

六、蛋白电泳相关试剂和缓冲液的配制251

七、淋巴细胞分离液253

八、常见有丝分裂原的配制254

九、其他试剂254