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第一篇 生化物质分离纯化技术的基本原理1

第一章　培养液的预处理2

一、凝聚和絮凝2

二、加沉淀剂2

三、调节培养液的pH3

四、吸附作用3

第二章　细胞破碎3

一、机械法4

二、非机械法6

第三章　基因工程菌包涵体的分离纯化7

一、包涵体的洗涤和目标蛋白的变性溶解8

二、目标蛋白的复性8

第四章　沉淀法10

一、盐析法沉淀蛋白质10

二、等电点沉淀法13

三、有机溶剂沉淀法13

四、其他沉淀方法13

第五章　膜分离技术14

一、膜分离技术的分类14

二、膜的性能参数15

三、膜的结构和材料16

四、膜组件型式和操作方式17

五、浓差极化18

六、影响膜分离的因素19

七、膜的污染和清洗20

八、膜亲和过滤法20

第六章　有机溶剂萃取法20

一、基本原理和操作20

二、分配系数和弱电解质的分配平衡21

三、影响萃取操作的因素22

第七章　两水相萃取24

一、基本概念24

二、成相系统24

三、分配平衡25

四、影响分配系数K？的因素26

五、亲和分配27

第八章　反胶束萃取28

一、基本概念和反胶束相系统28

二、反胶束萃取过程30

三、影响反胶束萃取的因素31

四、亲和反胶束萃取33

第九章　超临界流体萃取33

一、超临界流体的特性33

二、超临界流体的溶解性能35

三、超临界流体萃取的基本操作和设备36

四、夹带剂对超临界CO2流体萃取的强化作用37

五、超临界萃取的特点和应用37

第十章　微波萃取技术38

一、基本原理38

二、微波萃取的特点39

三、影响微波萃取的因素40

四、微波萃取设备41

五、微波萃取技术的应用42

第十一章　离子交换法42

一、离子交换剂42

二、离子交换树脂的分类43

三、离子交换树脂几个主要的物理参数45

四、离子交换树脂的交换能力和选择性46

五、离子交换树脂和操作条件的选择47

第十二章　大网格（大孔）树脂吸附法47

一、大网格树脂吸附剂的结构和类型47

二、吸附等温线49

三、大网格树脂吸附法提取生化物质工艺条件的选择49

第十三章　色层分离法51

一、基本概念51

二、凝胶层析53

三、离子交换层析55

四、亲和层析57

第十四章　电泳技术59

一、基本原理59

二、凝胶电泳60

三、SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳61

四、等电聚焦电泳62

参考文献65

第二篇 生物分离工程基础实验67

实验一 絮凝技术预处理发酵液及滤饼的质量比阻测定67

实验二　碱性蛋白酶的盐析沉淀69

实验三　Folin法测定碱性蛋白酶活性71

实验四　有机溶剂萃取法中pH对表观分配系数的影响74

实验五　反胶束萃取法pH对萃取率的影响76

实验六　PEG/(NH4)2SO4两水相系统的相图78

实验七　两水相系统中蛋白质分配系数的测定79

实验八　考马斯亮蓝比色法测定蛋白质含量81

实验九　离子交换树脂总交换容量的测定82

实验十　大网格吸附树脂的吸附等温线的制作86

实验十一　凝胶层析法测定蛋白质相对分子质量88

实验十二　聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳测定蛋白质的等电点91

第三篇 生物分离工程大型综合实验95

实验一　四环素的沉淀法提取及鉴定95

Ⅰ 四环素的沉淀法提取工艺95

Ⅱ 比色法测定四环素的化学效价97

Ⅲ 薄板层析法鉴定四环素成品纯度98

实验二 用超滤技术浓缩和分离碱性蛋白酶100

实验三 用两种分离技术提取红霉素的工艺比较104

Ⅰ 有机溶剂萃取法制备硫氰酸红霉素的工艺研究104

Ⅱ 大网格树脂吸附法提取红霉素的工艺研究106

Ⅲ 比色法测定红霉素效价109

实验四 用反胶束萃取技术提取胰蛋白酶111

Ⅰ 反胶束萃取法提取胰蛋白酶的工艺研究111

Ⅱ 胰蛋白酶酶活和比活的测定方法114

实验五　超临界萃取青蒿素和HPLC鉴定116

Ⅰ 超临界CO2流体萃取青蒿素116

Ⅱ 用高效液相色谱（HPLC）鉴定青蒿素纯度119

实验六　用微波萃取和大网格树脂吸附法提取茶多酚122

Ⅰ 微波萃取和常规萃取提取茶多酚的工艺比较123

Ⅱ 大网格树脂吸附法精制茶多酚126

Ⅲ 酒石酸亚铁分光光度法测定茶多酚含量128

实验七　用两种分离技术提取柠檬酸的工艺比较129

Ⅰ 钙盐沉淀法提取柠檬酸130

Ⅱ 离子交换法提取柠檬酸134

实验八　离子交换法提取抗生素的工艺研究137

实验九　离子交换法制备纯水140

实验十　凝胶层析法纯化胰激肽原酶144

Ⅰ Sephadex G-75凝胶层析法纯化胰激肽原酶144

Ⅱ 紫外分光光度法测定胰激肽原酶活性148

实验十一　重组人酸性成纤维细胞生长因子的分离和纯化150

Ⅰ 菌体的细胞破碎和前处理150

Ⅱ 亲和层析法纯化目标蛋白153

Ⅲ SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定相对分子质量及纯度155

实验十二　基因工程血管生长抑素包涵体的变性和复性工艺研究159

Ⅰ 菌体的细胞破碎和洗涤160

Ⅱ 目标蛋白的变性溶解和凝胶层析纯化的工艺研究162

Ⅲ 目标蛋白的复性工艺研究165

Ⅳ 四唑盐（MTT）比色法检测细胞活性167

实验十三　包涵体TRAIL蛋白的复性和纯化170

Ⅰ 包涵体TRAIL蛋白复性的前处理171

Ⅱ　包涵体复性方法的研究173

Ⅲ 用亲和层析和离子交换层析法分离纯化目标蛋白复性液176

附录181

一、实验室常用酸碱的密度和浓度181

二、一些常见蛋白质相对分子质量参考值181

三、一些常见蛋白质的等电点参考值182

四、某些氨基酸的等电点参考值183

五、硫酸铵饱和度计算表184

六、酸度计标准缓冲溶液的配制方法185

七、常用缓冲溶液的配制方法186